目的

探讨微小RNA(miR)–调控高糖诱导的心肌细胞肥大的机制。

方法

利用生物信息学方法预测调控Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)的候选miR。在糖尿病组小鼠(db/db小鼠)和对照组小鼠(db/m小鼠)心肌组织中验证所有候选miR的表达，并分别与Rac1mRNA做Pearson相关性分析。体外实验，将原代培养的乳鼠心肌细胞分为对照组(葡萄糖浓5mmol/L)和高糖组(葡萄糖浓度33mmol/L，HG组)。光镜下观察各组乳鼠心肌细胞的形态学变化。采用实时逆转录聚合酶链反应(RT–PCR)检测两组乳鼠心肌细胞中miR–和Rac1mRNA表达水平。再将原代乳鼠心肌细胞分为4组，分别为正常糖组(葡萄糖浓度5mmol/L，对照组)、高糖组(葡萄糖浓度33mmol/L，HG组)、正常糖＋miR–模拟物组(miR–组)和高糖＋miR–模拟物组(HG＋miR–组)。采用Lipofectamine转染miR–模拟物(终浓度为nmol/L)。分别采用RT–PCR和蛋白免疫印迹法检测乳鼠心肌细胞中Rac1、β–肌球蛋白重链(β–MHC)、α–平滑肌肌动蛋白(α–SMA)的mRNA和蛋白表达水平。

结果

生物信息学方法预测到参与调控Rac1的候选miR共6个，分别为miR–、miR––3p、miR–、miR–a、miR–和miR–b。糖尿病组小鼠心肌组织中miR–和miR––3pmRNA表达水平均明显低于对照组(P均0.05)，且miR–、miR––3pmRNA均与Rac1mRNA表达水平呈负相关(相关系数分别为r＝–0.，r＝–0.)，miR–与Rac1负相关性最为显著。体外实验结果显示HG组乳鼠心肌细胞中miR–mRNA表达水平明显低于对照组(P0.05)，Rac1mRNA表达水平则明显高于对照组(P0.05)；光镜下观察HG＋miR–组乳鼠心肌细胞肥大程度轻于HG组；HG＋miR–组乳鼠心肌细胞Rac1和β–MHCmRNA及蛋白表达水平均明显高于HG组(P均0.05)。

结论

miR–可能通过其靶基因Rac1对高糖诱导的心肌细胞肥大进行调控。

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